荧光定量pcr技术原理是怎样的？

　　荧光定量pcr技术是一种在PCR扩增反应中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。以下是对其技术原理的详细解释：

　　

　　1、荧光化学物质的使用：

　　

　　荧光染料和探针是两种主要的荧光化学物质。非特异性检测方法使用过量的荧光染料，如SYBRGreenI，这些染料特异性地掺入DNA双链后发射出荧光信号。特异性检测方法则利用标记有荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来识别扩增产物。

　　

　　2、Ct值与起始模板量的关系：

　　

　　在PCR扩增的指数期，模板的Ct值（即每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数）与其起始拷贝数之间存在线性关系。这意味着，通过测量Ct值，可以推算出起始模板的数量。

　　

　　3、标准曲线的建立：

　　

　　为了对未知模板进行定量分析，需要首先建立一个标准曲线。这通常通过使用一系列已知浓度的标准品进行PCR扩增，并测量其Ct值来实现。然后，将Ct值与标准品的起始拷贝数对数作图，得到一条标准曲线。这样，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

　　

　　4、实时监测与定量：

　　

　　qPCR技术的核心在于实时监测PCR进程中的荧光信号变化。随着PCR循环的进行，荧光信号逐渐增强，当信号达到预设的阈值时，记录此时的循环次数（Ct值）。由于荧光信号的增加与PCR产物的增加全同步，因此可以通过测量荧光信号的变化来实时监测PCR进程，并最终实现对起始模板的定量分析。

　　

　　总的来说，荧光定量PCR技术结合了PCR技术的高灵敏性和光谱技术的高精确性，使得DNA定量分析更加准确、快速和方便。它广泛应用于基因表达研究、病原体检测、肿瘤基因检测等多个领域。